HtrA4 Double Nickaseプラスミド (m): sc-436033-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HtrA4 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HtrA4ダブルニカースプラスミド（m）およびHtrA4ダブルニカースプラスミド（m2）は、Htra4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HtrA4 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-436033-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HtrA4 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-436033-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのHtra4は、分泌型セリンプロテアーゼであるHtrA4（HtrAファミリー）をコードしており、ミスフォールドしたタンパク質や損傷タンパク質を切断する品質管理酵素として、細胞外および細胞周辺のプロテオスタシス維持に寄与します。HtrAプロテアーゼは、小胞体ストレス応答（UPR）に連動したシグナル伝達などのストレス応答プログラムと交差し、細胞の生存、接着、組織リモデリングを規定する成長因子や細胞外マトリックス関連経路にも影響を及ぼし得ます。HtrA4の発現変化は、炎症、血管生物学、生殖・胎盤生理といった文脈で報告されており、ストレスや微小環境に焦点を当てた研究における機序解明の結節点として有用であることが示唆されます。マウスモデルではHtrA4を攪乱することで、疾患に伴う組織機能障害に関連する、プロテアーゼ駆動のリモデリングやシグナル伝達のクロストークの解析に役立ちます。
HtrA4 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Htra4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Htra4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Htra4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Htra4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。