HSPA1L Double Nickaseプラスミド (h): sc-400479-NIC

HSPA1Lは、HSP70シャペロンファミリーに属するストレス誘導性タンパク質をコードしており、未折りたたみポリペプチドに結合して、その再フォールディング、細胞内輸送、または分解に向けた選別（トリアージ）を調整することで、タンパク質恒常性（プロテインホメオスタシス）の維持を支えます。HSPA1Lは、プロテオトキシックストレス下において、熱ショック応答シグナル伝達、共シャペロンにより制御されるATPアーゼサイクル、ならびにユビキチン‐プロテアソーム系やオートファジー経路とのクロストークなど、細胞のプロテオスタシス・ネットワークに関与します。タンパク質の折りたたみ能とストレス耐性を調節することで、HSPA1Lは、シャペロンのバランスが細胞の生存、分化、免疫や生殖に関わる生物学に影響する状況において重要です。シャペロン活性の破綻は、ストレス耐性の変化や疾患に関連したタンパク質品質管理の異常と結び付けられており、HSPA1Lはプロテオスタシスの作用機序研究に有用な標的となります。

HSPA1L ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HSPA1L 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HSPA1L内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HSPA1Lの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HSPA1Lが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。