Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HSP90B1/HSP90 beta Double Nickaseプラスミド (m): sc-420980-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HSP90B1/HSP90 beta Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HSP90B1/HSP90 betaダブルニカースプラスミド（m）およびHSP90B1/HSP90 betaダブルニカースプラスミド（m2）は、Hsp90ab1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HSP90B1/HSP90 beta Double Nickaseプラスミド (m) | sc-420980-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSP90B1/HSP90 beta Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-420980-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Hsp90ab1 は、細胞質に存在する HSP90β 分子シャペロンをコードしており、タンパク質キナーゼ、ステロイドホルモン受容体、シグナル伝達アダプターなど幅広いクライアントタンパク質のフォールディング促進、安定化、立体構造の成熟を助けることで、プロテオスタシスの維持に寄与します。共シャペロンと協調した ATP 依存的なシャペロン反応サイクルを通じて、ストレス応答、タンパク質品質管理、多タンパク質複合体の組み立てに関与し、MAPK/ERK、PI3K–AKT、自然免疫シグナル伝達などの経路とも連携します。マウスの HSP90β 活性は、オートファジーやプロテアソームによる分解回転といった細胞恒常性維持プロセスとも関連しており、熱ショックや酸化ストレスに対する応答を形作ります。シャペロン機能の破綻は、がんにおける腫瘍性シグナル伝達への依存性、神経変性疾患におけるタンパク質ミスフォールディング、炎症性疾患の機序といった文脈でしばしば研究されており、Hsp90ab1 は経路解析に有用な結節点となります。
HSP90B1/HSP90 beta ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Hsp90ab1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Hsp90ab1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Hsp90ab1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Hsp90ab1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。