HSP90B1/HSP90 beta Double Nickaseプラスミド (h): sc-400214-NIC

HSP90AB1 は、細胞質型 HSP90β（HSP90B1/HSP90 beta）をコードしており、ATP 依存性の分子シャペロンとして、シグナル伝達、細胞周期制御、ストレス応答に関与する多様なクライアントタンパク質の安定化と成熟を担います。プロテオスタシス・ネットワークの中核因子として、HSP90β は共シャペロン群やユビキチン–プロテアソーム系と協調し、タンパク質の折りたたみ、品質管理、分解を制御することで、MAPK/ERK、PI3K–AKT、DNA 損傷応答などの経路に影響を与えます。HSP90β 機能の攪乱は、プロテオームの安定性やプロテオトキシック・ストレスへの対処を再編成し得るため、がん化シグナル伝達の依存性、神経変性に関連するタンパク質ミスフォールディング、炎症性あるいは代謝性ストレス表現型の研究と関連します。多くのキナーゼや転写制御因子が HSP90 活性に依存することから、HSP90AB1 は、シャペロンによって緩衝されたシグナル伝達の頑健性や、ストレス下での細胞適応を検証する目的でしばしば用いられます。

HSP90B1/HSP90 beta ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HSP90AB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HSP90AB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HSP90AB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HSP90AB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。