HSP 90α CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400088-ACT

HSP90AA1は、ヒトの熱ショックタンパク質HSP90α（HSP 90α）をコードしており、HSP90αはATP依存性の分子シャペロンとして細胞内に豊富に存在します。HSP90αは、キナーゼ、ステロイドホルモン受容体、転写因子などを含む多様なクライアントタンパク質の安定化やフォールディングを担います。HSP90αは、共シャペロンとの協調、タンパク質成熟の制御、さらに熱ショックをはじめとする各種ストレス下でのミスフォールドタンパク質の緩衝を通じて、プロテオスタシスと細胞のストレス適応を支えます。クライアントネットワークを介して、HSP90αはMAPKやPI3K–AKTなどのシグナル伝達経路に加え、細胞周期制御やDNA損傷応答のプロセスとも関与します。HSP90AA1の発現異常や依存性は、腫瘍細胞におけるシグナル伝達の再配線、神経変性疾患でのタンパク質凝集、炎症性ストレス応答などの文脈で頻繁に研究されており、機構解明を目的とした経路研究における中核的ノードとなっています。

HSP 90α CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HSP90AA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HSP 90α CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HSP90AA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHSP90AA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HSP 90αの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHSP90AA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHSP 90α依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHSP90AA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHSP 90α経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。