HSP 75 Double Nickase Plasmid (h): sc-402640-NIC

TRAP1 (HSP 75) ist ein Chaperon der HSP90-Familie in den Mitochondrien, das die Proteinhomöostase, die Faltung und die Stabilisierung von Client-Proteinen innerhalb der mitochondrialen Matrix unterstützt. Es moduliert die mitochondriale Atmung und die bioenergetische Homöostase, ist in die Kontrolle reaktiver Sauerstoffspezies eingebunden und kann die Permeabilitäts-Transition sowie stressadaptive Signalwege beeinflussen. Über diese Funktionen wirkt TRAP1 auf Signalwege ein, die die mitochondriale Dynamik mit zellulären Überlebensprogrammen verknüpfen, einschließlich Proteostase-Netzwerken und metabolischer Umprogrammierung. Eine dysregulierte TRAP1-Expression oder -Aktivität wurde mit veränderter mitochondrialer Funktion in der Krebsbiologie, in Kontexten neurodegenerativer Erkrankungen und bei weiteren Störungen in Verbindung gebracht, die durch oxidativen Stress und ein metabolisches Ungleichgewicht gekennzeichnet sind.

HSP 75 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TRAP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TRAP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TRAP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TRAP1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.