HSP 60 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400336

Panoramica

HSPD1 codifica la chaperonina mitocondriale HSP60, un componente centrale del sistema delle chaperonine che favorisce il ripiegamento e l’assemblaggio di proteine codificate dal nucleo e importate nella matrice mitocondriale. HSP60 sostiene la proteostasi mitocondriale, la capacità di fosforilazione ossidativa e le risposte allo stress, tamponando il misfolding proteico e limitando il danno proteotossico. L’alterazione di HSPD1 compromette il controllo di qualità mitocondriale e può modificare la suscettibilità all’apoptosi, l’omeostasi redox e la segnalazione dell’immunità innata associate alla disfunzione mitocondriale. Un’espressione o una localizzazione disregolate di HSP60 sono state associate a neurodegenerazione, disturbi cardiometabolici e adattamento allo stress correlato al cancro, rendendola un nodo di grande interesse per studi meccanicistici della segnalazione mitocondriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HSP 60 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HSPD1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HSPD1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HSPD1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HSP 60.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HSPD1 per lo studio della segnalazione di HSP 60, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HSPD1 critici per la funzione di HSP 60
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HSPD1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HSP 60 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HSP 60 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HSPD1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HSP 60 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HSP 60 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HSPD1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HSPD1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.