HSP 60 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400336

概要

HSPD1 は、ミトコンドリア・シャペロニンである HSP60 をコードしており、ミトコンドリア・マトリックスに輸入される核コードタンパク質の折りたたみと組み立てを促進するシャペロニン・システムの中核構成要素です。HSP60 は、タンパク質のミスフォールディングを緩衝し、プロテオトキシックな損傷を抑えることで、ミトコンドリアのプロテオスタシス、酸化的リン酸化能、ならびにストレス応答を支えます。HSPD1 の撹乱はミトコンドリアの品質管理を破綻させ、ミトコンドリア機能障害に関連するアポトーシス感受性、レドックス恒常性、自然免疫シグナル伝達を変化させ得ます。HSP60 の発現や局在の異常は、神経変性、心代謝性疾患、がんにおけるストレス適応と関連づけられており、ミトコンドリア・シグナル伝達の機序研究において重要な標的分子（ノード）となります。

HSP 60 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHSPD1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HSPD1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HSPD1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HSP 60タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HSP 60シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HSPD1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HSP 60の機能に不可欠なHSPD1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HSPD1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HSP 60 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHSP 60 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HSPD1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HSP 60 HDRプラスミド（h）および HSP 60 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHSPD1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHSPD1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。