HSP 40-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403819-ACT

DNAJA1 codifica a co-chaperona humana HSP 40-4 (homóloga de Hsp40/DnaJ), uma proteína com domínio J que estimula a atividade ATPase de HSPA/Hsp70 para promover o dobramento, redobramento e a triagem de proteínas cliente durante o estresse de proteostase. Ao coordenar-se com a Hsp70 e outras redes de chaperonas, a HSP 40-4 contribui para o controle de qualidade proteico, o manejo de proteínas mal dobradas e as respostas celulares ao choque térmico e ao estresse oxidativo, com ligações funcionais às vias de ubiquitina–proteassoma e de autofagia. A capacidade alterada de chaperonas e o desequilíbrio da proteostase estão implicados na tolerância ao estresse de células cancerosas e em patologias de mau dobramento proteico, tornando o DNAJA1 um ponto útil para investigar mecanismos de adaptação ao estresse e a regulação, dependente de chaperonas, de proteínas de sinalização.

HSP 40-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DNAJA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HSP 40-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DNAJA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DNAJA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HSP 40-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DNAJA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HSP 40-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HSP 40-4 em células tumorais com expressão de DNAJA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.