hSNF2H CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403825-ACT

SMARCA5 は、ヌクレオソームの位置を再配置してクロマチンのアクセス性を制御する、ヒト ISWI 型 ATP 依存性クロマチンリモデラー hSNF2H をコードする。hSNF2H は、ACF、CHRAC、WICH、RSF などのリモデリング複合体を介して、DNA 複製と修復、転写制御、ならびに高次クロマチン構造の形成を支える。ヌクレオソーム間隔の調整や、複製と連動したクロマチン組み立ての促進を通じて、SMARCA5 は細胞周期の進行およびゲノム安定性に関わる経路に影響を与える。クロマチンリモデリングの破綻や SMARCA5 活性の変化は、増殖性および神経発生関連の表現型に関与することが示唆されており、疾患に関連する遺伝子発現プログラムを支えるエピジェネティック機構の研究に有用な標的となっている。

hSNF2H CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SMARCA5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

hSNF2H CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SMARCA5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSMARCA5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性hSNF2Hの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSMARCA5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるhSNF2H依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSMARCA5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるhSNF2H経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。