HRASLS3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409231-ACT

PLA2G16 codifica a HRASLS3, uma fosfolipase/aciltransferase associada à membrana que modula a composição lipídica celular ao catalisar reações de fosfolipase A1/A2 e de acilação de lisofosfolipídeos. Ao remodelar lipídios derivados de fosfatidilcolina e gerar ácidos graxos bioativos, a HRASLS3 influencia a dinâmica de membrana, o tráfego vesicular e a sinalização mediada por lipídios, que se interconecta com vias relacionadas a Ras e com respostas ao estresse celular. Alterações na atividade de PLA2G16/HRASLS3 têm sido associadas a desregulação do metabolismo lipídico e a fenótipos relevantes para transformação oncogênica, invasão e sinalização inflamatória em múltiplos contextos de modelos. Essas propriedades fazem da HRASLS3 um alvo útil para estudos mecanísticos que conectam remodelamento lipídico à proliferação, migração e adaptação metabólica.

HRASLS3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLA2G16 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HRASLS3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLA2G16 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLA2G16, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HRASLS3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLA2G16 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HRASLS3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HRASLS3 em células tumorais com expressão de PLA2G16 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.