Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
HPRT Double Nickaseプラスミド (m2): sc-420943-NIC-2
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HPRT Double Nickaseプラスミド (m2)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HPRTダブルニカースプラスミド（m2）およびHPRTダブルニカースプラスミド（m22）は、Hprtを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: HPRT 抗体 (F-1): sc-376938
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HPRT Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-420943-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスHprtは、プリン回収経路の中核酵素であるヒポキサンチン-グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（HPRT）をコードしており、PRPPを用いてヒポキサンチンおよびグアニンをそれぞれIMPおよびGMPへ変換する反応を触媒することでヌクレオチド恒常性を維持し、de novoプリン合成への依存を抑制する。HPRT活性はプリンプールの調節を通じて細胞増殖や代謝ストレス応答に影響し、回収経路の機能や変異原性を評価する目的で、HAT選択や6-チオグアニン耐性アッセイに広く利用されている。HPRT機能の変化はプリン代謝の破綻と関連し、マウスモデルにおいてDNA損傷応答、ゲノム編集の結果、ならびに神経行動学的・造血系表現型に対する代謝的寄与を解析する際の標準的なベンチマーク遺伝子座としても広く用いられる。さらに、X連鎖のハウスキーピング遺伝子として、Hprtは発現正規化のための堅牢な参照遺伝子であると同時に、哺乳類細胞のエンジニアリング工程における選択／カウンターセレクションマーカーとしても機能する。
HPRT ダブルニカースプラスミド（m2）は、mouse 細胞株における Hprt 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Hprt内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Hprtの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Hprtが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。