HP1γ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417205-ACT

CBX3は、ヘテロクロマチンタンパク質1ガンマ（HP1γ）をコードしており、ヒストンH3のリジン9メチル化に結合して高次クロマチン構造の編成を助ける、クロマチン関連因子である。HP1γは、エピジェネティックなライター／リーダーやRNAプロセシング機構との相互作用を介して、ヘテロクロマチン形成、転写制御、DNA複製、DNA損傷応答に関与する。クロマチンのアクセシビリティとゲノム安定性を形作ることで、CBX3は細胞周期の進行、分化プログラム、ストレス応答性の遺伝子発現ネットワークに影響を及ぼす。HP1γ活性の破綻やCBX3発現パターンの変化は、複数のがんおよび神経発達疾患の文脈で観察される異常なエピジェネティック状態と関連づけられており、クロマチンおよびゲノム維持の研究における機序的ハブとしての有用性を支持している。

HP1γ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CBX3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HP1γ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CBX3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCBX3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HP1γの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCBX3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHP1γ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCBX3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHP1γ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。