HoxC9 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404568-NIC

HOXC9は、ホメオボックス転写因子HoxC9をコードしており、配列特異的にDNAへ結合する調節因子として、胚発生における前後軸のパターニングを担い、神経系および中胚葉の分化プログラムを誘導します。ヒト細胞では、HoxC9はHOXクラスターの制御回路や補因子依存的な転写複合体を介して、系譜特異化、神経成熟、領域アイデンティティを制御するクロマチン状態と転写ネットワークに影響を与えます。HOXC9発現の異常は複数の腫瘍状況で報告されており、HOX駆動性の遺伝子プログラムの変化が、増殖、遊走、分化状態に影響し得ます。発生制御因子として、状況依存的にがん促進的または腫瘍抑制的な関連を示すHOXC9は、細胞運命転換や疾患に関連する転写リモデリングにおける役割の観点から、しばしば研究されています。

HoxC9 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HOXC9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HOXC9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HOXC9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HOXC9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。