HoxA9 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401583-LAC

HOXA9 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxA9, un regolatore chiave della definizione dell’asse antero-posteriore durante l’embriogenesi e dei programmi delle cellule staminali e progenitrici ematopoietiche. HoxA9 controlla l’impegno di linea, l’autorinnovamento e la differenziazione attraverso il legame al DNA in modo sequenza-specifico e interazioni cooperative con cofattori quali PBX e MEIS, plasmando reti trascrizionali che influenzano la progressione del ciclo cellulare e lo stato della cromatina. Un’espressione aberrante di HOXA9 è fortemente associata a una differenziazione mieloide alterata e a circuiti trascrizionali leucemogenici, ed è spesso studiata insieme a regolatori epigenetici a monte che modulano i loci HOX. Di conseguenza, HOXA9 è ampiamente utilizzato come nodo modello per indagare la regolazione genica dello sviluppo, la riprogrammazione trascrizionale e le dipendenze delle vie oncogeniche.

Le particelle di attivazione lentivirale HoxA9 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HOXA9 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HoxA9 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HOXA9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HoxA9. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HOXA9 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.