HoxA11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-405264-ACT-2

O HOXA11 humano codifica o fator de transcrição homeobox HoxA11, um regulador de ligação ao DNA que ajuda a estabelecer o padrão ântero-posterior e a identidade regional durante a embriogênese e contribui para programas de diferenciação em linhagens do mesênquima e do trato reprodutivo. O HoxA11 modula a expressão gênica por meio do reconhecimento de motivos homeobox e do controle transcricional dependente de cofatores, interagindo com redes de sinalização do desenvolvimento que governam a morfogênese, a remodelação tecidual e decisões de destino celular. A expressão desregulada de HOXA11 ou alterações epigenéticas têm sido associadas a malformações congênitas e a cânceres nos quais programas aberrantes de genes HOX sustentam estados alterados de diferenciação e proliferação. A edição gênica direcionada a HOXA11 e ensaios de genômica funcional são utilizados para mapear elementos cis-regulatórios, definir circuitos transcricionais a jusante e investigar fenótipos relevantes para o desenvolvimento e para doenças em modelos de células humanas.

HoxA11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HOXA11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HoxA11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HOXA11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HOXA11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HoxA11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HOXA11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HoxA11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HoxA11 em células tumorais com expressão de HOXA11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.