HoxA10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420900

Panoramica

Hoxa10 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxA10, un regolatore legante il DNA che definisce la patterning dell’asse embrionale antero-posteriore e specifica l’identità regionale nei tratti urogenitale e riproduttivo in sviluppo. Nel topo, HoxA10 contribuisce alle reti regolatorie geniche dello sviluppo coordinando programmi trascrizionali che controllano la determinazione del destino cellulare, la differenziazione e la morfogenesi, con effetti dipendenti dal contesto su proliferazione e rimodellamento tissutale. La sua attività interagisce con cofattori più ampi della famiglia HOX/TALE e con la regolazione della cromatina per stabilire stati trascrizionali specifici di segmento. Un’espressione deregolata di HOXA10 è stata associata ad alterazioni della differenziazione ematopoietica e a programmi trascrizionali leucemogeni, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico in modelli di disturbi dello sviluppo e della specificazione di lineaggio rilevante per il cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxA10 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hoxa10 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hoxa10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hoxa10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HoxA10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hoxa10 per lo studio della segnalazione di HoxA10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hoxa10 critici per la funzione di HoxA10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hoxa10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HoxA10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HoxA10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hoxa10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HoxA10 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HoxA10 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hoxa10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hoxa10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.