Hox11 Plasmide Double Nickase (h): sc-404662-NIC

TLX1 (Hox11) è un fattore di trascrizione homeobox che coordina il patterning embrionale e l’organogenesi, con ruoli di primo piano nei programmi di sviluppo ematopoietico e neurale. Legandosi a motivi di DNA specifici di sequenza, Hox11 regola reti geniche che controllano l’impegno di linea, la proliferazione e la differenziazione, intersecandosi con vie regolatorie trascrizionali ed epigenetiche che determinano il destino cellulare. Un’espressione deregolata di TLX1 è fortemente associata alla leucemia linfoblastica acuta a cellule T (T-ALL), in cui programmi trascrizionali aberranti contribuiscono ad alterazioni della differenziazione e della sopravvivenza cellulare. In quanto regolatore dello sviluppo, TLX1 viene inoltre utilizzato come marcatore e come nodo meccanicistico per studiare l’attività di fattori di trascrizione oncogenici e il rimodellamento delle reti geniche dello sviluppo nelle cellule umane.

Hox11 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TLX1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TLX1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TLX1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TLX1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.