Plásmido CRISPR de Activación (h) Homer-2a/b: sc-402910-ACT

HOMER2 codifica la proteína de andamiaje Homer-2a/b, un componente de la densidad postsináptica que acopla los receptores metabotrópicos de glutamato del grupo I con efectores intracelulares, incluidos los receptores de IP3, los complejos Shank y los canales TRPC. Al organizar ensamblajes receptor–efector, Homer-2a/b regula la señalización de Ca2+, la plasticidad sináptica, programas transcripcionales dependientes de la actividad y la remodelación del citoesqueleto en células excitables. La señalización dependiente de HOMER2 se ha implicado en la función de los circuitos neuronales y la neuroadaptación, y la expresión alterada o la conectividad de red de los andamiajes de la familia HOMER se asocia con fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo. Además de los contextos del SNC, HOMER2 contribuye a una arquitectura más amplia de señalización de GPCR, lo que lo hace relevante para estudios del acoplamiento estímulo–respuesta y de la dinámica de complejos proteicos.

Homer-2a/b El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HOMER2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Homer-2a/b El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HOMER2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HOMER2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Homer-2a/b. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HOMER2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Homer-2a/b en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Homer-2a/b en células tumorales con expresión de HOMER2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.