HNRNPA1L2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403579-ACT

HNRNPA1L2 codifica um fator semelhante à ribonucleoproteína nuclear heterogênea A1, envolvido na ligação a RNA e na regulação gênica pós-transcricional, incluindo o splicing de pré‑mRNA, a estabilidade do mRNA e o transporte nucleocitoplasmático. Como parte de complexos ribonucleoproteicos, a HNRNPA1L2 está posicionada para influenciar a escolha de isoformas de transcritos e o acoplamento entre a transcrição e o processamento de RNA, moldando programas de expressão gênica de maneira dependente do contexto. A regulação alterada de proteínas da família hnRNP tem sido associada a metabolismo de RNA desregulado, padrões de splicing aberrantes e respostas de estresse celular relevantes para a biologia do câncer e a pesquisa em neurodegeneração. Essas características tornam a HNRNPA1L2 um alvo útil para dissecar redes de processamento de RNA e seus efeitos a jusante sobre a diversidade do proteoma.

HNRNPA1L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HNRNPA1L2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HNRNPA1L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HNRNPA1L2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HNRNPA1L2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HNRNPA1L2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HNRNPA1L2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HNRNPA1L2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HNRNPA1L2 em células tumorais com expressão de HNRNPA1L2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.