hnRNP U CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401375-ACT

HNRNPUは、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質U（hnRNP U）をコードしている。hnRNP UはRNAおよびDNAに結合する多機能因子で、クロマチンや核マトリックスと相互作用し、転写制御、pre-mRNAのプロセシング、ならびに高次のゲノム構造の形成を協調的に調整する。hnRNP Uは共転写的スプライシング、mRNAの安定性、長距離クロマチン相互作用に関与し、RNA代謝を核内アーキテクチャおよび細胞周期依存的な遺伝子発現プログラムと結び付けている。HNRNPUの発現量（dosage）や機能の変化は神経発達関連の表現型や遺伝子発現の異常と関連づけられており、ゲノム制御機構を研究するうえで重要なノードとなる。さらに、その広範な相互作用ネットワークにより、hnRNP Uはストレス応答性の転写ネットワークや、神経細胞の分化およびシナプス関連遺伝子の制御を担う経路とも結び付いている。

hnRNP U CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HNRNPUの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

hnRNP U CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HNRNPU 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHNRNPU転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性hnRNP Uの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHNRNPU遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるhnRNP U依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHNRNPU発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるhnRNP U経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。