hnRNP L Double Nickaseプラスミド (h): sc-402196-NIC

ヒトの **HNRNPL** は hnRNP L をコードする。hnRNP L は CA リッチ配列を認識する RNA 結合タンパク質であり、pre-mRNA の選択的スプライシング、転写産物の安定化、ならびに核—細胞質間の RNA プロセシングを協調的に制御する。hnRNP L はスプライソソームおよびリボ核タンパク質複合体内で機能し、エクソンの取り込みや、転写と RNA 成熟の共役を調整することで、細胞周期制御やストレス応答性遺伝子発現などのプログラムに影響を与える。アイソフォーム特異的発現の制御を通じて、hnRNP L は MAPK やアポトーシス関連経路を含むシグナル伝達の出力を、転写後段階で調節し得る。hnRNP L の活性異常およびスプライシング変化は、増殖性の表現型や、多様なヒト疾患で観察される異常な RNA プロセシングパターンと関連づけられており、スプライシング依存的な遺伝子制御の機構研究における重要な標的となっている。

hnRNP L ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HNRNPL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HNRNPL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HNRNPLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HNRNPLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。