hnRNP E1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401557-ACT

PCBP1は、RNAおよびDNAに結合する因子であるヘテロ核リボヌクレオタンパク質E1（hnRNP E1）をコードしており、mRNAの安定性、選択的スプライシング、輸送、翻訳を制御することで転写後の遺伝子発現調節を統括します。hnRNP E1は標的転写産物中のCリッチな配列要素を認識し、シグナル入力を調節されたタンパク質合成へと結び付けるリボヌクレオタンパク質複合体に関与します。これらの作用を通じて、PCBP1は分化、ストレス応答、プロテオーム恒常性の維持などの細胞過程に寄与します。PCBP1/hnRNP E1の発現や機能の変化は、がん生物学をはじめ、異常なRNAプロセシングに関連するその他の疾患で観察される遺伝子発現プログラムの破綻と関連付けられています。

hnRNP E1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PCBP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

hnRNP E1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PCBP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPCBP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性hnRNP E1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPCBP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるhnRNP E1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPCBP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるhnRNP E1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。