hnRNP A0 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406924-ACT

HNRNPA0 codifica a hnRNP A0, uma proteína ligante de RNA que se associa a complexos de ribonucleoproteínas nucleares heterogêneas (hnRNPs) para influenciar a regulação gênica pós-transcricional. A hnRNP A0 tem sido implicada no controle da estabilidade e da tradução de mRNAs, incluindo transcritos envolvidos no controle do ciclo celular e na sinalização responsiva ao estresse, conectando-a a vias mais amplas de metabolismo de RNA e de checkpoints. Ao modular o destino de mRNAs específicos, a hnRNP A0 pode afetar as respostas celulares a dano no DNA, inflamação e sinais de proliferação. A atividade desregulada da família hnRNP e programas alterados de processamento de RNA são frequentemente observados no câncer e em outros distúrbios com controle de expressão gênica comprometido, tornando o HNRNPA0 um ponto útil para estudos mecanísticos.

hnRNP A0 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HNRNPA0 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hnRNP A0 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HNRNPA0 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HNRNPA0, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hnRNP A0. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HNRNPA0 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hnRNP A0 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hnRNP A0 em células tumorais com expressão de HNRNPA0 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.