HMGI-C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401573-ACT

HMGA2 codifica a proteína arquitetural da cromatina HMGI-C, uma proteína HMG não histona que se liga a DNA rico em AT para modular a organização dos nucleossomos e programas transcricionais que controlam a proliferação, a diferenciação e estados semelhantes aos de células-tronco. Participa de redes de remodelamento da cromatina e coopera com vias como a sinalização TGF-β/SMAD e a regulação pós-transcricional LIN28/let-7 para influenciar a transição epitélio–mesênquima, a progressão do ciclo celular e o timing do desenvolvimento. A expressão desregulada de HMGA2 está associada a paisagens transcricionais alteradas em múltiplos contextos tumorais e é uma característica recorrente de neoplasias mesenquimais, sustentando sua ampla relevância para a transformação oncogênica e o remodelamento tecidual. Como regulador nuclear com ampla influência genômica, HMGA2 é frequentemente estudado por seus papéis na organização do genoma, no comprometimento de linhagem e na cooperatividade entre fatores de transcrição.

HMGI-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HMGA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HMGI-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HMGA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HMGA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HMGI-C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HMGA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HMGI-C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HMGI-C em células tumorais com expressão de HMGA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.