HLA-F Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410821-ACT

HLA-F codifica uma molécula não clássica de MHC classe I expressa na superfície celular e em compartimentos intracelulares, contribuindo para a modulação imune e para processos relacionados à apresentação de antígenos. Pode interagir com receptores inibitórios e ativadores em células NK e em subpopulações de células T, moldando respostas citotóxicas, tolerância imunológica e sinalização inflamatória. O HLA-F é regulado por estresse celular e por estados de ativação, conectando-o a vias envolvidas na vigilância imunológica e nas respostas à infecção. Padrões alterados de expressão de HLA-F foram relatados em diferentes doenças mediadas pelo sistema imune e em diversos tipos de câncer, motivando estudos mecanísticos sobre evasão imune e regulação do microambiente.

HLA-F O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HLA-F sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HLA-F O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HLA-F em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HLA-F, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HLA-F. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HLA-F nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HLA-F no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HLA-F em células tumorais com expressão de HLA-F silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.