Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histone Deacetylase 8 (HDAC8): sc-400757-ACT

HDAC8 code l’histone désacétylase 8, une désacétylase de lysine dépendante du Zn2+ qui module l’accessibilité de la chromatine et la transcription en retirant des groupes acétyle de substrats histoniques et non histoniques. Par régulation épigénétique, HDAC8 influence des processus cellulaires fondamentaux, notamment la progression du cycle cellulaire, les programmes de différenciation et les réponses aux dommages de l’ADN, en s’articulant avec les voies de remodelage de la chromatine et de contrôle transcriptionnel. Une activité altérée de HDAC8 a été associée à une expression génique dérégulée en biologie du cancer ainsi qu’à des phénotypes développementaux et neurobiologiques, ce qui en fait un nœud utile pour étudier un contrôle épigénétique dépendant du contexte. La modulation expérimentale de HDAC8 aide à préciser comment la dynamique de la désacétylation façonne les choix de lignée et les réseaux transcriptionnels d’adaptation au stress.

Histone Deacetylase 8 (HDAC8) Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HDAC8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone Deacetylase 8 (HDAC8) Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HDAC8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HDAC8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone Deacetylase 8 (HDAC8). Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HDAC8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone Deacetylase 8 (HDAC8) au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone Deacetylase 8 (HDAC8) dans les cellules tumorales présentant une expression de HDAC8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.