Histone cluster 1 H2BK Double Nickaseプラスミド (h): sc-417678-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Histone cluster 1 H2BK Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Histone cluster 1 H2BKダブルニカースプラスミド（h）およびHistone cluster 1 H2BKダブルニカースプラスミド（h2）は、HIST1H2BKを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Histone cluster 1 H2BK Double Nickaseプラスミド (h) | sc-417678-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Histone cluster 1 H2BK Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-417678-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HIST1H2BK は、複製依存的に発現する H2B ファミリーのヒストンをコードしており、ヌクレオソームに組み込まれてゲノム DNA を凝縮し、クロマチンのアクセシビリティを調節します。ヌクレオソームの組み立て、ヒストン交換、および高次クロマチン構造の形成における役割を通じて、Histone cluster 1 H2BK は転写制御、DNA 複製タイミング、ならびに DNA 損傷シグナル伝達と修復に影響を及ぼします。ユビキチン化やリン酸化を含む H2B の翻訳後修飾は、細胞周期の進行とゲノム安定性を協調的に制御する他のヒストン修飾とのクロストークに関与します。ヒストン遺伝子量の異常な変動やクロマチン状態の変化は、がん関連の転写プログラムや異常な DNA 修復と広く関連しているため、HIST1H2BK は疾患関連のクロマチンリモデリングに関わるエピジェネティック機構を研究するうえで有用な座位です。
Histone cluster 1 H2BK ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HIST1H2BK 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HIST1H2BK内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HIST1H2BKの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HIST1H2BKが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。