HIRA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404262-ACT

ヒトHIRAはヒストンシャペロンをコードしており、ASF1A/ASF1Bと協調して、DNA複製に依存しない形でヒストンバリアントH3.3を導入し、クロマチンのアクセス性や長期的な転写状態を形成します。HIRA依存的なH3.3の取り込みは、ゲノム安定性、複製ストレス応答、老化関連クロマチン再構築、ならびに発生および細胞周期に関わる遺伝子プログラムの適切な制御を支えます。プロモーター、エンハンサー、DNA損傷部位におけるヌクレオソーム形成に影響を与えることで、HIRAはエピジェネティックな維持機構を、分化・増殖・細胞老化を制御する経路と結び付けます。HIRAの機能や発現の破綻は、がん生物学や神経発達の文脈で観察される異常なクロマチン構造や転写プログラムと関連付けられており、機序解明を目的とするエピジェネティクス研究において有用な標的（ノード）となっています。

HIRA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HIRAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HIRA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HIRA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHIRA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HIRAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHIRA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHIRA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHIRA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHIRA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。