HIF1a Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420856-ACT

O gene **Hif1a** do camundongo codifica o fator induzível por hipóxia 1 alfa (HIF1a), um fator de transcrição sensível ao oxigênio que integra as respostas celulares à redução da tensão de oxigênio. Quando estabilizado, o HIF1a dimeriza com o ARNT para ativar genes contendo elementos de resposta à hipóxia, que regulam o metabolismo glicolítico, a sinalização angiogênica, a eritropoiese, a função mitocondrial e a sobrevivência celular, em interação com sinais das vias PI3K–AKT–mTOR e MAPK. O HIF1a também coordena programas inflamatórios e imunes por meio de crosstalk com o NF-κB e vias redox, moldando a polarização mieloide e a adaptação de barreiras. A sinalização desregulada de HIF1a é amplamente utilizada como um nó mecanístico em estudos de isquemia, inflamação crônica, fibrose, doença metabólica e biologia da hipóxia tumoral em sistemas de modelos murinos.

HIF1a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hif1a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HIF1a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hif1a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hif1a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HIF1a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hif1a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HIF1a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HIF1a em células tumorais com expressão de Hif1a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.