HIF PHD3 Double Nickaseプラスミド (m): sc-431083-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HIF PHD3 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HIF PHD3ダブルニカースプラスミド（m）およびHIF PHD3ダブルニカースプラスミド（m2）は、Egln3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HIF PHD3 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-431083-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスEgln3は、HIF PHD3（EGLN3）をコードしている。HIF PHD3は2-オキソグルタル酸/Fe(II)依存性のプロリン水酸化酵素であり、HIF-αサブユニットを水酸化することで酸素を感知し、VHL介在性のユビキチン化とプロテアソーム分解を促進する。この制御を通じてPHD3は、解糖系、血管新生シグナル、赤血球産生応答、ミトコンドリア適応、低酸素条件下での細胞生存を制御する低酸素誘導性の転写プログラムを調節する。Egln3は低酸素によって転写誘導され、代謝状態や活性酸素種（ROS）からの入力を統合して、HIF経路の振幅と持続時間を形作る。EGLN3/HIFシグナルの破綻は、腫瘍生物学、虚血関連の組織ストレス、肺血管リモデリング、炎症性微小環境などとの関連が文献で報告されており、酸素恒常性の機構研究に有用な結節点となっている。
HIF PHD3 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Egln3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Egln3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Egln3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Egln3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。