Hic-5 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402786-NIC

TGFB1I1 codifica a Hic-5 (também conhecida como ARA55), um adaptador de adesão focal contendo domínios LIM que integra sinais da matriz extracelular com a remodelação do citoesqueleto e respostas transcricionais. A Hic-5 localiza-se nas adesões focais e no núcleo, onde atua como plataforma de montagem para complexos de sinalização ligados à via integrina/FAK–SRC, à regulação de GTPases da família Rho e a vias de mecanotransdução que coordenam adesão, migração e a dinâmica de fibras de estresse. É induzível por TGF-β e participa de programas de remodelação dependentes de TGF-β, incluindo efeitos específicos do contexto sobre a transição epitélio–mesênquima e a ativação de fibroblastos. A atividade desregulada de TGFB1I1/Hic-5 tem sido associada à invasão e metástase de células cancerosas, a redes de sinalização fibrótica e à remodelação do microambiente inflamatório, tornando-a um nó útil para estudar o controlo transcricional dependente de adesão.

Hic-5 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus TGFB1I1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de TGFB1I1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função TGFB1I1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com TGFB1I1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.