HES4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408938-ACT

ヒトHES4は、Hairy/Enhancer-of-splitファミリーに属する塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型の転写抑制因子をコードしており、カノニカルNotchシグナル伝達の下流エフェクターとして機能します。HES4はE-box様モチーフに結合し、コリプレッサー複合体をリクルートすることで、細胞運命決定、分化のタイミング制御、前駆細胞様状態の維持に関わる転写プログラムを調節します。HES4の活性は発生や系譜特異化の過程と関連し、幹細胞性（stemness）や分化を制御する経路とも交差するため、がんをはじめとする増殖性疾患における転写制御の破綻を研究する上でも重要です。Notch–HES軸の攪乱は分化の進行方向を変化させ、増殖能を変える可能性があることから、HES4は状況依存的に遺伝子発現ネットワークを制御する因子としてしばしば研究されています。

HES4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HES4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HES4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HES4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHES4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HES4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHES4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHES4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHES4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHES4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。