Herc5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404993-ACT

ヒトのHERC5は、インターフェロン刺激により誘導されるE3リガーゼであるHerc5をコードしており、新規に合成されたタンパク質へのISG15結合（ISGylation）を触媒することで、自然免疫シグナル伝達および抗ウイルス制限に影響を与えます。Herc5はISG15／ユビキチン様修飾経路の一部として機能し、I型インターフェロン応答時にE1/E2酵素と協調して、タンパク質の安定性、局在、相互作用ネットワークを調節します。インターフェロン駆動性のプロテオスタシスやストレス応答プログラムを制御することで、HERC5は病原体認識や炎症性シグナル伝達に関わる経路にも影響を及ぼします。ISGylationの異常やインターフェロンシグネチャーは免疫介在性病態や腫瘍—免疫相互作用と関連づけられており、HERC5は免疫学およびがん生物学における機構研究の標的として重要です。

Herc5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HERC5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Herc5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HERC5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHERC5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Herc5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHERC5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHerc5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHERC5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHerc5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。