Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
HELIC2 Double Nickase Plasmid (m): sc-435793-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HELIC2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HELIC2 Double-Nickase-Plasmid (m) und HELIC2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Snrnp200 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HELIC2: sc-393170
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HELIC2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-435793-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HELIC2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-435793-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Snrnp200 kodiert das Mausprotein HELIC2, eine essentielle DExD/H-Box-RNA-Helikase innerhalb des U5-kleinen nukleären Ribonukleoproteins, die die Aktivierung des Spleißosoms sowie die katalytischen Schritte des prä-mRNA-Spleißens unterstützt. Durch das Umlagern von RNA-Protein-Interaktionen während der Erkennung von Spleißstellen und der Exonligierung trägt HELIC2 zur Aufrechterhaltung der Transkriptom-Integrität bei und verknüpft die Spleißdynamik mit weitergehenden Prozessen der RNA-Verarbeitung und der Regulation der Genexpression. Störungen zentraler spleißosomaler Helikasen können weitreichende Veränderungen des alternativen Spleißens und zelluläre Stressantworten auslösen, wodurch Snrnp200 einen geeigneten Ausgangspunkt für die Untersuchung des RNA-Stoffwechsels sowie von Genotyp-Phänotyp-Beziehungen in Säugersystemen bietet. Die funktionelle Untersuchung von HELIC2 ist zudem relevant, um in experimentellen Kontexten Mechanismen zu modellieren, durch die Störungen des Spleißosoms zu krankheitsassoziiertem Fehl-Spleißen und veränderter Proteostase beitragen.
HELIC2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Snrnp200-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Snrnp200 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Snrnp200-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Snrnp200-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.