HECTD3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406532-ACT

HECTD3は、HECTドメインを有するE3ユビキチンリガーゼをコードしており、経路構成因子をユビキチン依存的に修飾することで、タンパク質の安定性やシグナル伝達の出力を制御します。ユビキチン化のダイナミクスを形作ることで、HECTD3は自然免疫シグナル伝達、炎症性の転写プログラム、ならびにNF-κBやインターフェロン関連ネットワークへ収束するストレス応答性経路などの細胞プロセスに影響を及ぼします。ユビキチンリガーゼ活性の変化や、それに伴う下流シグナルの再配線は、免疫機能の破綻やがん化表現型にしばしば関与することから、HECTD3はシグナル伝達およびプロテオスタシスの機構研究における有用な結節点となります。研究者は一般に、E3リガーゼがヒト細胞において経路の振幅、持続時間、そしてクロストークをどのように調整するのかを理解するためにHECTD3を解析します。

HECTD3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HECTD3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HECTD3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HECTD3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHECTD3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HECTD3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHECTD3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHECTD3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHECTD3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHECTD3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。