HECTD1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-431500-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HECTD1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HECTD1ダブルニカースプラスミド（m）およびHECTD1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Hectd1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HECTD1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-431500-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HECTD1 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-431500-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Hectd1は、マウス細胞においてHECT型E3ユビキチンリガーゼであるHECTD1をコードしており、ユビキチン依存的なタンパク質安定性の制御やシグナル出力の調節を促進します。基質のユビキチン化を介して、HECTD1はプロテオスタシスの維持に寄与するとともに、細胞極性、細胞骨格ダイナミクス、ストレス応答性シグナル伝達に関連する経路を調節し、増殖および分化プログラムの形成に影響を与えます。遺伝学的・機能的研究により、HECTD1活性の変化が胚発生や組織形態形成の異常と関連することが示されており、発生生物学や先天性表現型の基盤となる機構における重要性が浮き彫りになっています。ユビキチン―プロテアソーム系の一要素として、HECTD1は経路間クロストークや、状況依存的な細胞シグナルネットワークの再編成に及ぼす影響の観点からもしばしば研究されています。
HECTD1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Hectd1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Hectd1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Hectd1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Hectd1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。