HEATR6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412958-ACT

HEATR6 codifica uma proteína contendo repetições HEAT, prevista para atuar como um arcabouço (scaffold) para complexos macromoleculares de proteínas, dando suporte à organização espacial de fatores de sinalização e regulatórios no citoplasma e no núcleo. Proteínas enriquecidas em repetições HEAT frequentemente participam do transporte nucleocitoplasmático, da montagem de ribonucleoproteínas e da modulação de programas transcricionais ao coordenar interações entre múltiplas proteínas. Embora a HEATR6 ainda não esteja completamente caracterizada, sua arquitetura de domínios sugere possíveis papéis na proteostase e na regulação do estado celular, processos frequentemente alterados em contextos de proliferação e de resposta ao estresse. A desregulação de redes associadas a arcabouços e ao transporte é relevante para estudos de estabilidade do genoma, metabolismo de RNA e alterações no controle transcricional associadas a doenças.

HEATR6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HEATR6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HEATR6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HEATR6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HEATR6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HEATR6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HEATR6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HEATR6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HEATR6 em células tumorais com expressão de HEATR6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.