Particules Lentivirales d'Activation (h2) HDGF: sc-402859-LAC-2

Chez l’humain, HDGF (hepatoma-derived growth factor) code une protéine nucléaire et sécrétée, se liant à l’héparine, capable d’agir comme facteur mitogène et pro-survie, avec des rôles dans la progression du cycle cellulaire, la régulation transcriptionnelle et des processus associés à la chromatine. HDGF est lié à des réseaux de signalisation qui soutiennent la prolifération, la migration et des programmes angiogéniques, et il contribue aux réponses au stress ainsi qu’au remodelage tissulaire via une activité autocrine/paracrine dépendante du contexte. Une expression dérégulée de HDGF a été rapportée dans de nombreux cancers ainsi que dans des pathologies fibrotiques et vasculaires, où elle est fréquemment associée à des phénotypes cellulaires agressifs et à des interactions modifiées avec le microenvironnement tumoral. La perturbation génétique de HDGF facilite des études mécanistiques de la biologie des facteurs de croissance, des motifs de translocation nucléaire (p. ex. la liaison à la chromatine médiée par le domaine PWWP) et la cartographie des voies en aval dans des modèles d’oncogenèse, d’inflammation et de fibrose.

Les particules d'activation lentivirales HDGF (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HDGF dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HDGF (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HDGF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HDGF. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HDGF ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.