HDC Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403606-ACT

O gene HDC humano codifica a histidina descarboxilase, a enzima limitante da velocidade que converte L-histidina em histamina, uma amina biogénica que modula a sinalização inflamatória e neuroimunitária. A histamina produzida por mastócitos, basófilos e outras linhagens mieloides que expressam HDC regula vias mediadas por GPCR (recetores H1–H4), influenciando a libertação de citocinas, a permeabilidade vascular e o recrutamento/migração de leucócitos. A atividade da HDC também contribui para a regulação do ácido gástrico por sinalização parácrina e afeta a neurotransmissão no sistema nervoso central. A desregulação da biologia da histamina tem sido associada à inflamação alérgica, à asma e a outras condições mediadas pelo sistema imunitário, tornando a HDC um alvo útil para estudar a imunidade inata e a sinalização do microambiente tecidular.

HDC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HDC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HDC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HDC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HDC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HDC. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HDC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HDC no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HDC em células tumorais com expressão de HDC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.