Hck Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401507-ACT

O gene humano **HCK** codifica a Hck, uma tirosina quinase não receptora da família Src expressa predominantemente em linhagens mieloides, onde acopla sinais de imunorreceptores e de integrinas a cascatas de fosforilação a jusante. A Hck regula a remodelação do citoesqueleto, a adesão, a quimiotaxia, a fagocitose e a produção de mediadores inflamatórios por meio de vias que convergem com a sinalização PI3K–AKT, MAPK/ERK e STAT. Em contextos hematopoiéticos e imunológicos, a atividade desregulada de Hck tem sido associada a respostas imunes inatas alteradas e a redes de sinalização aberrantes observadas em leucemias e outras patologias relacionadas à inflamação. Como quinase proximal na sinalização acionada por receptores, **HCK** é frequentemente estudado para dissecar programas de fosforilação dependentes de estímulo e o controle por retroalimentação em células mieloides.

Hck O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HCK sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Hck O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HCK em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HCK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Hck. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HCK nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Hck no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Hck em células tumorais com expressão de HCK silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.