Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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HB9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420869
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HB9 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico HB9, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HB9 Antibody (F-5): sc-515769
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HB9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-420869 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Mnx1 (HB9) codifica un fattore di trascrizione homeobox essenziale per lo sviluppo del midollo spinale ventrale e per la specificazione e la maturazione dei motoneuroni somatici. HB9 partecipa a programmi trascrizionali che coordinano l’identità dei sottotipi neuronali, la guida assonale e la connettività neuromuscolare attraverso la regolazione dell’espressione genica specifica di linea. Nel pancreas, Mnx1 contribuisce anche alle decisioni di differenziamento della linea endocrina, collegandosi a vie di sviluppo che modellano l’organogenesi e la determinazione del destino cellulare. Un’alterazione dell’espressione o della funzione di MNX1 è stata associata a fenotipi di sviluppo dei motoneuroni ed è stata studiata nel contesto di disturbi congeniti dello sviluppo neurologico e pancreatico, oltre che della disregolazione di linea nella biologia dei tumori.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HB9 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mnx1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mnx1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mnx1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HB9.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mnx1 per lo studio della segnalazione di HB9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Mnx1 critici per la funzione di HB9
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mnx1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal HB9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HB9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mnx1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal HB9 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HB9 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mnx1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mnx1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.