HAX-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402087-ACT

HAX1 codifica a HAX-1, uma proteína predominantemente associada às mitocôndrias e ao retículo endoplasmático, que regula a apoptose, a homeostase do cálcio e a dinâmica do citoesqueleto. Ela participa da resposta ao estresse e da sinalização de sobrevivência ao modular a integridade da membrana mitocondrial e ao interagir com processos relacionados à família BCL-2, influenciando a ativação de caspases e o equilíbrio de espécies reativas de oxigênio. A HAX-1 também contribui para a remodelação da actina e para o tráfego intracelular, o que a vincula a programas de migração e adesão celular. A expressão ou função desregulada de HAX1 tem sido associada a alterações na sobrevivência de células hematopoéticas, na homeostase de células imunes e na biologia tumoral, tornando-o um alvo útil para estudar vias de sobrevivência e decisões de destino celular.

HAX-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HAX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HAX-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HAX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HAX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HAX-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HAX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HAX-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HAX-1 em células tumorais com expressão de HAX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.