Haptoglobin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401468-ACT

HP codifica a haptoglobina, uma glicoproteína secretada de fase aguda que se liga à hemoglobina livre com alta afinidade para prevenir danos oxidativos induzidos pelo heme e conservar o ferro após hemólise intravascular. O complexo haptoglobina–hemoglobina é depurado principalmente por macrófagos CD163-positivos, ligando o HP à regulação imune inata, à sinalização inflamatória e à homeostase redox. Como parte da resposta de fase aguda, a expressão de HP é modulada por vias mediadas por citocinas, incluindo IL-6/STAT3 e programas transcricionais relacionados que coordenam a inflamação sistêmica. Alterações na abundância de HP e nos padrões de glicoformas têm sido associadas a estados hemolíticos, distúrbios inflamatórios e fenótipos de doenças cardiometabólicas, sustentando sua relevância para estudos mecanísticos de imunometabolismo e estresse oxidativo.

Haptoglobin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Haptoglobin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Haptoglobin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Haptoglobin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Haptoglobin em células tumorais com expressão de HP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.