Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HAI-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423129
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HAI-2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico HAI-2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HAI-2 Antibody (H-9): sc-398119
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HAI-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423129 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Spint2 codifica l’inibitore delle serin-proteasi HAI-2, un regolatore di tipo Kunitz associato alla membrana che limita la proteolisi pericellulare inibendo serin-proteasi transmembrana di tipo II come matriptasi ed epsina. Riducendo l’attivazione di fattori di crescita mediata da proteasi e modulando il turnover della matrice extracellulare, HAI-2 influenza l’integrità della barriera epiteliale, il rimodellamento tissutale e i programmi di polarità cellulare. Nei sistemi murini, l’alterata attività di SPINT2/HAI-2 viene utilizzata per studiare lo squilibrio tra proteasi e inibitori associato a disfunzione epiteliale e a segnali stromale–epiteliali aberranti. Questi processi si intersecano con vie che regolano adesione, migrazione e cascate di segnalazione dipendenti da proteasi, rilevanti per la modellizzazione dell’infiammazione e della biologia tumorale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HAI-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Spint2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Spint2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Spint2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HAI-2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Spint2 per lo studio della segnalazione di HAI-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Spint2 critici per la funzione di HAI-2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Spint2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal HAI-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HAI-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Spint2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal HAI-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HAI-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Spint2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Spint2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.