Partículas Lentivirales de Activación (h) HAI-1: sc-404011-LAC

SPINT1 codifica el inhibidor tipo 1 del activador del factor de crecimiento de hepatocitos (HAI-1), un inhibidor de serinproteasas de tipo Kunitz anclado a la membrana que limita la proteólisis pericelular en las superficies epiteliales. HAI-1 regula la activación de proteasas como matriptasa (ST14) y hepsina (HPN), influyendo así en la remodelación de la matriz extracelular, la integridad de las uniones célula–célula y la homeostasis de la barrera epitelial. Mediante el control del procesamiento dependiente de proteasas de factores de crecimiento y sustratos, SPINT1 modula ejes de señalización vinculados a la diferenciación epitelial y al comportamiento migratorio, incluidas vías conectadas con la activación de HGF/MET. La actividad desregulada de SPINT1/HAI-1 se ha asociado con alteraciones de la integridad epitelial y con programas impulsados por proteasas relevantes para la inflamación y la biología del cáncer.

Las partículas de activación lentiviral HAI-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SPINT1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HAI-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SPINT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HAI-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SPINT1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.