HADHB CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403234-ACT

HADHBはミトコンドリア三機能性タンパク質（mitochondrial trifunctional protein）のβサブユニットをコードしており、長鎖脂肪酸β酸化の中核を担う構成要素です。HADHAと協調して、エノイルCoAヒドラターゼ反応および3-ヒドロキシアシルCoAデヒドロゲナーゼ反応の段階を触媒します。この酵素複合体は、長鎖アシルCoAをアセチルCoA産生へと導くことでエネルギー恒常性を支え、脂質分解をミトコンドリア呼吸および代謝の柔軟性と結び付けます。HADHB機能の破綻は、ミトコンドリア脂肪酸酸化異常症や代謝ストレス表現型と関連しており、断食時や高需要条件下でのエネルギー産生低下などが含まれます。実験系では、HADHBの発現や活性は、ミトコンドリア代謝、レドックスバランス、脂質駆動性のシグナル応答といった文脈で研究されることが一般的です。

HADHB CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HADHBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HADHB CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HADHB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHADHB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HADHBの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHADHB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHADHB依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHADHB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHADHB経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。