Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
HADHA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430176
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HADHA Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico HADHA, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HADHA Antibody (E-8): sc-374497
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HADHA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-430176 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino **Hadha** codifica la subunità alfa della proteina trifunzionale mitocondriale (HADHA), un complesso enzimatico chiave nella β-ossidazione degli acidi grassi a catena lunga, che catalizza le attività di enoil-CoA idratasi e 3-idrossiacil-CoA deidrogenasi. HADHA sostiene il metabolismo energetico mitocondriale accoppiando il catabolismo dei lipidi alla produzione di acetil-CoA e al conseguente flusso nel ciclo dell’acido citrico (TCA), con ampie ricadute sull’equilibrio redox e sull’adattamento metabolico. L’alterazione della funzione di HADHA è associata a un utilizzo compromesso degli acidi grassi a livello mitocondriale ed è rilevante per gli errori congeniti del metabolismo che colpiscono tessuti ossidativi come fegato, cuore e muscolo scheletrico. Hadha è quindi ampiamente studiato in vie che intersecano l’omeostasi mitocondriale, le risposte allo stress nutrizionale e la segnalazione mediata dai lipidi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HADHA (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hadha in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hadha insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hadha a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HADHA.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hadha per lo studio della segnalazione di HADHA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Hadha critici per la funzione di HADHA
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hadha per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal HADHA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HADHA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hadha. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal HADHA Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HADHA (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hadha per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hadha definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.