HACE1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-431639-ACT

マウスHACE1（HECTドメインおよびアンキリンリピート含有E3ユビキチンタンパク質リガーゼ1）は、特定の基質へユビキチンを転移させることで、タンパク質の代謝回転およびシグナル伝達を制御するE3ユビキチンリガーゼをコードします。HACE1は、細胞骨格の構築、小胞輸送、ストレス応答経路に関与することが示されており、細胞の遊走や接着を形作る低分子量GTPアーゼ依存的なプロセスにも影響を与え得ます。ユビキチン依存的な品質管理とシグナルの強度（振幅）を調節することで、プロテオスタシスや酸化還元バランスが損なわれやすい状況下において、HACE1は細胞恒常性の維持を支えます。HACE1活性の変化は、増殖制御の破綻やゲノム安定性に関わる表現型と関連づけられており、腫瘍抑制因子様機能の機序解析や、疾患モデルにおける経路の再配線（リワイヤリング）を検討する研究において重要です。

HACE1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Hace1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HACE1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Hace1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHace1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HACE1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHace1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHACE1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHace1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHACE1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。