G_γ13 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403045-ACT

GNG13は、活性化したGPCRを下流のエフェクター経路へ結び付ける三量体Gタンパク質複合体の構成要素である、ヒトGタンパク質γサブユニットGγ13をコードします。Gβγダイマーの一部として、Gγ13はホスホリパーゼCβやイオンチャネルなどの標的へのシグナル伝播を調節し、カルシウムフラックスやMAPK/ERK応答を含むセカンドメッセンジャー出力を形成します。GNG13の発現は感覚系に関連する状況で高く、精密なGPCRカップリングが求められる化学感覚および神経シグナル伝達における役割を支持します。Gタンパク質サブユニットの発現異常やGPCR経路の再構築は、がんや神経生物学に関連する状態でしばしば観察されるため、GNG13はシグナル伝達の可塑性や細胞状態制御の機構研究に有用です。

Gγ13 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GNG13の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Gγ13 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GNG13 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGNG13転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Gγ13の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGNG13遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGγ13依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGNG13発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGγ13経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。