G_{β 1} Double Nickaseプラスミド (h): sc-401901-NIC

GNB1は、Gタンパク質βサブユニット1（Gβ1）をコードしており、活性化したGPCRを下流エフェクターへと連結する三量体Gタンパク質の必須構成要素です。受容体刺激により、Gβ1はGγと複合体を形成し、セカンドメッセンジャー産生やイオンチャネル活性を制御する経路を調節します。これには、アデニリルシクラーゼ、ホスホリパーゼCβ、MAPKシグナル伝達の調節が含まれます。これらのネットワークを通じて、Gβ1は増殖、遊走、神経の興奮性といった細胞応答の協調に寄与します。GNB1が関与するGPCR–Gタンパク質シグナル伝達の破綻は、神経発達に関する表現型に加え、がんやその他の複雑疾患に関連するより広範なシグナル異常にも関与すると示唆されています。

Gβ 1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GNB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GNB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GNB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GNB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。